فلوروسینس مائکروسکوپ آپٹیکل مائکروسکوپ کی ایک قسم ہے جو نمونہ کو روشن کرنے اور نمونے میں فلورو کروم کو اکسانے کے لئے ایک اعلی شدت والے روشنی کا ذریعہ استعمال کرتی ہے۔ نمونہ کی روشنی عام طور پر روشنی کے ذریعہ سے کی جاتی ہے جو الٹرا وایلیٹ روشنی کو خارج کرتی ہے۔ وہ بڑے پیمانے پر حیاتیاتی، طبی اور صنعتی شعبوں میں استعمال ہوتے ہیں۔
فلوروسینس خوردبین کیسے کام کرتی ہے؟
ایک فلوروسینس مائکروسکوپ الٹرا وایلیٹ روشنی پیدا کرنے کے لیے مرکری یا زینون لیمپ کا استعمال کرتی ہے۔ روشنی خوردبین میں آتی ہے اور ایک ڈیکروک آئینے سے ٹکرا جاتی ہے - ایک ایسا آئینہ جو طول موج کی ایک حد کو منعکس کرتا ہے اور دوسری رینج کو گزرنے دیتا ہے۔ ڈیکروک آئینہ الٹراوائلٹ روشنی کو نمونے تک منعکس کرتا ہے۔ کچھ نمونے قدرتی طور پر بالائے بنفشی روشنی کے تحت فلوروسیس ہوتے ہیں کیونکہ ان میں فلوروسینٹ مادے جیسے کلوروفل ہوتے ہیں۔ اگر دیکھا جانے والا نمونہ قدرتی طور پر فلوروسینٹ نہیں ہوتا ہے، تو اسے فلوروسینٹ رنگوں سے داغ دیا جا سکتا ہے جسے فلورو کروم کہتے ہیں۔
فلوروسینس مائکروسکوپ کس چیز پر مشتمل ہے؟
1. روشنی کا ذریعہ
روشنی کے سب سے عام ذرائع مرکری، زینون اور ایل ای ڈی ہیں۔ مرکری فلوروسینس مائکروسکوپ کے لیے بہترین معیار کی روشنی فراہم کرتا ہے۔ ایل ای ڈی زیادہ مقبول ہو رہے ہیں کیونکہ وہ دوسرے ذرائع کے مقابلے میں کم مہنگے ہیں اور وہ کم بجلی استعمال کرتے ہیں۔
| مرکری لیمپ | زینون لیمپ | ایل ای ڈی | |
| خارج شدہ روشنی کی طول موج | 350-370 nm | 400nm سے 450nm | 400-700 nm |
| لائف ٹائم (گھنٹہ) | 200-300 | 400-600 | 10000 |
| فائدہ | 1. ہائی انٹینسٹی لائٹ، سب سے عام روشنی کے ذرائع۔ 2. یہ تمام قسم کے فلوروفورس کو اکسانے کے لیے مضبوط الٹرا وائلٹ اور بلیو وائلٹ خارج کرتا ہے۔ 3. روشن اور رنگین تصاویر۔ | 1. سپیکٹرل شدت مستحکم ہے. 2. اورکت اور درمیانی اورکت میں مضبوط سپیکٹرل شدت۔ | 1. تبدیل کرنے کے لئے آسان. 2. گرم کرنے کی ضرورت نہیں۔ 3. فوری طور پر آن اور آف کیا جا سکتا ہے۔ 4. روشنی کے منبع کی شدت کو کنٹرول کریں۔ |
| نقصان | 1. ایک مختصر زندگی۔ 2. طویل گرم وقت. | 1. زیادہ گرمی کے لیے خصوصی کم وولٹیج DC پاور باکس کی ضرورت ہے۔ 2. مرکری لیمپ سے زیادہ مہنگا ہے۔ | 1. یووی لائٹ مرکری لیمپ سے کمزور ہے۔ 2. روشنی کی ہر طول موج کو ایک الگ ایل ای ڈی کی ضرورت ہوتی ہے کیونکہ وہ ان سے خارج ہونے والی تنگ بینڈوتھس کی وجہ سے۔ |
مرکری فلورسنٹ اٹیچمنٹ
ایل ای ڈی فلوروسینٹ اٹیچمنٹ
2. ایکسائٹیشن فلٹر
فلوروسینس مائکروسکوپ کے آپریشن کے لیے ایکسائٹیشن فلٹر ضروری ہے۔ یہ ایک چھوٹی طول موج کی روشنی سے گزرتا ہے، جسے فلوروسینٹ ڈائی جذب کر سکتا ہے۔ نیز، یہ دلچسپ روشنی کے دیگر ذرائع کو روکتا ہے۔
حوصلہ افزائی فلٹر (B, G, U, V)
3. Dichroic Mirror
dichroic آئینہ ایک قسم کا آپٹیکل فلٹر ہے جو دوسروں کو منتقل کرتے ہوئے مخصوص طول موج پر روشنی کو منعکس کرتا ہے۔ یہ جوش اور اخراج طول موج کو الگ کرنے کے لیے فلوروسینس خوردبینوں میں استعمال ہوتا ہے۔
4. اخراج کا فلٹر
اخراج کا فلٹر صرف فلوروفور کے ذریعہ خارج ہونے والی طول موجوں سے گزرتا ہے اور اس بینڈ کے باہر تمام ناپسندیدہ روشنی کو روکتا ہے – خاص طور پر حوصلہ افزائی طول موج۔
5. فلوروسینٹ رنگ
فلوروسینٹ رنگ وہ نامیاتی مرکبات ہیں جو فلوروسینس کی خاصیت رکھتے ہیں، جس کے ذریعے وہ انتہائی روشن بالائے بنفشی روشنی سے پرجوش ہونے کے بعد انتہائی متضاد نظر آنے والی سبز روشنی کو خارج کر کے فلوروسینٹ امیج بنا سکتے ہیں۔ عام طور پر استعمال ہونے والے فلوروسینٹ رنگ ہیں؛ DAPI (49,6-diamidino-2-phenylindole)، ایکریڈائن اورنج، اورامین-روڈامین، الیکسا فلورز، یا DyLight 488۔
فلوروسینس خوردبین کی کتنی اقسام ہیں؟
1. سیدھا ایپی فلوروسینس مائکروسکوپ:
یہ فلوروسینس مائکروسکوپ کی سب سے عام قسم ہے۔ فلوروفور کی حوصلہ افزائی اور فلوروسینس کا پتہ لگانے کا کام ایک ہی روشنی کے راستے (یعنی مقصد کے ذریعے) کیا جاتا ہے۔ فلوروسینس خوردبین کی اکثریت، خاص طور پر وہ جو لائف سائنسز میں استعمال ہوتی ہیں، ایپی فلوروسینس ڈیزائن کی ہیں۔
BS-2081F ریسرچ فلوروسینٹ بائیولوجیکل مائکروسکوپ
2. کنفوکل فلوروسینس مائکروسکوپ:
کنفوکل فلوروسینس مائیکروسکوپ: اس قسم کی فلوروسینس مائکروسکوپ لیزر اسکیننگ کو فلوروسینٹ الیومینیشن کے ساتھ جوڑ کر تصویر تیار کرتی ہے۔ اسے وسیع پیمانے پر ایپلی کیشنز میں استعمال کیا جا سکتا ہے، جیسے کہ خلیوں اور بافتوں کا مطالعہ کرنا، خلیوں کے اندر پروٹین اور دیگر مادوں کا پتہ لگانا، اور مواد کی موٹائی کی پیمائش کرنا۔
BS-2081F ریسرچ فلوروسینٹ بائیولوجیکل مائکروسکوپ
3. الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ
اس قسم کی خوردبین کا روشنی کا منبع اور کنڈینسر نیچے کی طرف منہ کرتے ہوئے اوپر واقع ہوتے ہیں۔ جس نمونے کی جانچ کی جا رہی ہے اس کی سطح کے حوالے سے روشنی کا زاویہ 90 ڈگری پر ہونا چاہیے۔
BS-2095F الٹا فلوروسینٹ مائکروسکوپ
فلوروسینس خوردبین کے فوائد اور نقصانات کیا ہیں؟
فوائد:
- جانداروں میں خلیات کو نقصان پہنچائے بغیر ان کے مشاہدے کے قابل بناتا ہے۔
- درست رنگوں کے ساتھ اعلی ریزولیوشن کی تصاویر فراہم کرتا ہے۔
- خلیوں میں رواں عمل کے مطالعہ کی اجازت دیتا ہے۔
- خلیوں کے اندر مختلف قسم کے مالیکیولز کی شناخت کے لیے استعمال کیا جائے، جیسے کہ پروٹین یا نیوکلک ایسڈ۔
نقصانات:
-یہ صرف فلوروسینٹ ڈائی کے ساتھ ٹیگ کردہ سیل کے اندر مخصوص ڈھانچے کے مشاہدے کی اجازت دیتا ہے۔
فلوروسینس کے عمل کے دوران الیکٹران کی حوصلہ افزائی کی وجہ سے فوٹو لیچنگ فلوروسینٹ رنگوں کے رد عمل والے مالیکیولز کو متاثر کر سکتی ہے۔ نتیجے کے طور پر، رد عمل والے رنگ فلوروسینس اخراج کی شدت کی اپنی کیمیائی خاصیت کھو سکتے ہیں۔
-خلیے فلوروسینٹ رنگوں کے ساتھ داغ لگنے کے بعد فوٹوٹوکسک اثر کے لیے حساس ہوتے ہیں، کیونکہ فلوروفور مالیکیول مختصر طول موج کی روشنی سے اعلی توانائی والے فوٹونز کو جذب کرتے ہیں۔
فلوروسینس مائکروسکوپ کے استعمال کیا ہیں؟
فلوروسینس خوردبین وسیع پیمانے پر تحقیق اور اطلاق کے مختلف شعبوں بشمول بائیو کیمسٹری، سیل بائیولوجی، مائکرو بایولوجی، امیونولوجی اور طب میں استعمال ہوتی ہیں۔
1. حیاتیات کے میدان میں، فلوروسینس مائکروسکوپ فلوروسینٹ ڈائی لیبلنگ کی مدد سے سیلولر اور سب مائکروسکوپک سیلولر اجزاء اور سرگرمیوں کی درست اور تفصیلی شناخت کے قابل بناتا ہے۔
2. طبی میدان میں، فلوروسینس مائیکروسکوپ بیکٹیریا اور وائرس کی موجودگی اور تقسیم کا پتہ لگانے کے لیے، یا سرجری کی سہولت کے لیے سرجیکل اہداف کو لیبل لگانے میں مدد کے لیے فلوروسینٹ ریجنٹس کا استعمال کر سکتی ہے۔
3. معدنیات کے میدان میں، فلوروسینس مائیکروسکوپ کا استعمال اکثر ایسے مادوں کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے، جن میں اسفالٹ، پیٹرولیم، کوئلہ، گرافین آکسائیڈ اور دیگر معدنیات شامل ہیں۔
4. میٹریل سائنس میں، فلوروسینس مائکروسکوپ کا استعمال ٹیکسٹائل انڈسٹری یا پیپر انڈسٹری میں فائبر پر مبنی مواد کا تجزیہ کرنے کے لیے کیا جا سکتا ہے۔
پوسٹ ٹائم: مارچ 14-2023