فلوروسینس مائیکروسکوپی نے حیاتیاتی نمونوں کو دیکھنے اور ان کا مطالعہ کرنے کی ہماری صلاحیت میں انقلاب برپا کر دیا ہے، جس سے ہمیں خلیات اور مالیکیولز کی پیچیدہ دنیا میں جانے کا موقع ملتا ہے۔ فلوروسینس مائکروسکوپی کا ایک اہم جزو روشنی کا ذریعہ ہے جو نمونے کے اندر فلوروسینٹ مالیکیولز کو اکسانے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ برسوں کے دوران، روشنی کے مختلف ذرائع استعمال کیے گئے ہیں، ہر ایک اپنی منفرد خصوصیات اور فوائد کے ساتھ۔
1. مرکری لیمپ
ہائی پریشر مرکری لیمپ، 50 سے 200 واٹ تک، کوارٹج گلاس کا استعمال کرتے ہوئے بنایا گیا ہے اور شکل میں کروی ہے۔ اس کے اندر پارے کی ایک خاص مقدار ہوتی ہے۔ جب یہ کام کرتا ہے، تو دو الیکٹروڈز کے درمیان خارج ہوتا ہے، جس سے پارا بخارات بن جاتا ہے، اور کرہ میں اندرونی دباؤ تیزی سے بڑھتا ہے۔ اس عمل میں عام طور پر 5 سے 15 منٹ لگتے ہیں۔
ہائی پریشر مرکری لیمپ کا اخراج الیکٹروڈ ڈسچارج کے دوران پارے کے مالیکیولز کے ٹوٹنے اور کم ہونے کے نتیجے میں ہوتا ہے، جس سے روشنی کے فوٹون کا اخراج ہوتا ہے۔
یہ مضبوط بالائے بنفشی اور نیلے بنفشی روشنی کا اخراج کرتا ہے، جو اسے مختلف فلوروسینٹ مواد کے لیے موزوں بناتا ہے، یہی وجہ ہے کہ یہ فلوروسینس مائیکروسکوپی میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتی ہے۔
2. زینون لیمپ
فلوروسینس مائکروسکوپی میں ایک اور عام طور پر استعمال ہونے والا سفید روشنی کا ذریعہ زینون لیمپ ہے۔ زینون لیمپ، مرکری لیمپ کی طرح، الٹرا وایلیٹ سے لے کر قریب اورکت تک طول موج کا ایک وسیع طول و عرض فراہم کرتے ہیں۔ تاہم، وہ ان کے حوصلہ افزائی سپیکٹرا میں مختلف ہیں.
مرکری لیمپ اپنے اخراج کو قریب الٹرا وائلٹ، نیلے اور سبز علاقوں میں مرکوز کرتے ہیں، جو روشن فلورسنٹ سگنلز کی تخلیق کو یقینی بناتا ہے لیکن مضبوط فوٹوٹوکسیٹی کے ساتھ آتا ہے۔ اس کے نتیجے میں، HBO لیمپ عام طور پر مقررہ نمونوں یا کمزور فلوروسینس امیجنگ کے لیے محفوظ ہوتے ہیں۔ اس کے برعکس، زینون لیمپ کے ذرائع میں ایک ہموار اتیجیت پروفائل ہے، جو مختلف طول موجوں پر شدت کا موازنہ کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ یہ خصوصیت کیلشیم آئن حراستی پیمائش جیسے ایپلی کیشنز کے لیے فائدہ مند ہے۔ زینون لیمپ بھی قریب اورکت رینج میں، خاص طور پر 800-1000 nm کے ارد گرد مضبوط حوصلہ افزائی کا مظاہرہ کرتے ہیں۔
XBO لیمپ کے HBO لیمپ پر درج ذیل فوائد ہیں:
① زیادہ یکساں سپیکٹرل شدت
② اورکت اور درمیانی اورکت والے خطوں میں زیادہ مضبوط سپیکٹرل شدت
③ توانائی کی زیادہ پیداوار، مقصد کے یپرچر تک پہنچنا آسان بناتی ہے۔
3. ایل ای ڈی
حالیہ برسوں میں، فلوروسینس مائکروسکوپی روشنی کے ذرائع کے دائرے میں ایک نیا دعویدار ابھرا ہے: ایل ای ڈی۔ ایل ای ڈی ملی سیکنڈ میں تیزی سے آن آف سوئچنگ کا فائدہ پیش کرتے ہیں، نمونے کی نمائش کے اوقات کو کم کرتے ہیں اور نازک نمونوں کی عمر کو بڑھاتے ہیں۔ مزید برآں، ایل ای ڈی لائٹ تیزی سے اور درست کشی کو ظاہر کرتی ہے، طویل مدتی لائیو سیل تجربات کے دوران نمایاں طور پر فوٹوٹوکسائٹی کو کم کرتی ہے۔
سفید روشنی کے ذرائع کے مقابلے میں، ایل ای ڈی عام طور پر ایک تنگ جوش کے اسپیکٹرم کے اندر خارج ہوتے ہیں۔ تاہم، متعدد ایل ای ڈی بینڈ دستیاب ہیں، جو ورسٹائل ملٹی کلر فلوروسینس ایپلی کیشنز کی اجازت دیتے ہیں، جو جدید فلوروسینس مائیکروسکوپی سیٹ اپ میں ایل ای ڈی کو تیزی سے مقبول انتخاب بناتے ہیں۔
4. لیزر لائٹ ماخذ
لیزر روشنی کے ذرائع انتہائی یک رنگی اور دشاتمک ہوتے ہیں، جو انہیں اعلیٰ ریزولوشن مائکروسکوپی کے لیے مثالی بناتے ہیں، بشمول سپر ریزولوشن تکنیک جیسے STED (Stimulated Emission Depletion) اور PALM (Photoactivated Localization Microscopy)۔ لیزر لائٹ کو عام طور پر ٹارگٹ فلوروفور کے لیے درکار مخصوص اتیجیت طول موج سے ملنے کے لیے منتخب کیا جاتا ہے، جو فلوروسینس اتیجیت میں اعلیٰ انتخاب اور درستگی فراہم کرتا ہے۔
فلوروسینس مائکروسکوپ لائٹ سورس کا انتخاب مخصوص تجرباتی تقاضوں اور نمونے کی خصوصیات پر منحصر ہے۔ اگر آپ کو کسی بھی مدد کی ضرورت ہو تو براہ کرم ہم سے بلا جھجھک رابطہ کریں۔
پوسٹ ٹائم: ستمبر 13-2023